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荧光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR，RTFQ PCR) 是1996 年由美国Applied Biosystems 公司推出的一种新定量试验技术，它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。
原理
PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；刚开始时, 探针结合在DNA任意一条单链上;PCR扩增时，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。
对土壤浸出液进行梯度稀释，建议你稀释倍数高一点。然后涂布培养，培养基自己看着办吧，不知道你要筛什么菌，还是做生物多样性。一般的lb、肉汤都行。得到单菌落后再划线纯化，得到纯菌种。之后进行16srdna的pcr，用通用引物也行，特定的某些引物也行。得到的dna进行电泳，确定相应引物的条带，然后确定该微生物属于哪个大类， 比如细菌还是古菌等。要是精确确定是哪个，就得把纯菌种pcr得到的dna送出去测序了。看16s rdna的同源性进行种属上的分类。