中海生物为您解答细胞培养常见问题的原因及对策细胞培养中的注意事项
1冷冻管应如何解冻？
取出冷冻管后，须立即放入37C水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管之爆裂。
2细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除DMSO？除少数特别注明对DMSO敏感之细胞外，绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞），在解冻之后，应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中，待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。
3+可否使用与原先培养条件不同之培养基？不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。
4可否使用与原先培养条件不同之血清种类？不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。
5何谓FBS,FCS,CS,HS FBS+(fetal+bovine+serum)+和FCS+(fetal+calf+serum)+是相同的意思，两者都是指胎牛血清，FCS乃错误的使用字眼，请不要再使用。CS+(calf+serum)+则是指小牛血清。HS+(horseserum)+则是指马血清。
6培养细胞时应使用5+%或10%+CO2？或根本没有影响？一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H++作为pH+的缓冲系统，而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3+含量为每公升3.7+g时，细胞培养时应使用10%+CO2；当培养基中NaHCO3为每公升1.5+g时，则应使用5%+CO2培养细胞。
7何时须更换培养基？视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。
8+培养基中是否须添加抗生素？++除于特殊筛选系统中外，一般正常培养状态下，培养基中不应添加任何抗生素。
9+附着性细胞继代时所使用之trypsin-EDTA浓度？应如何处理？一般使用之trypsin-EDTA+浓度为0.05%+trypsin-0.53m+MEDTA.4+Na。++第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于–20+C，避免反复冷冻解冻造成trypsin之活性降低，并可减少污染之机会。
10+悬浮性细胞应如何继代处理？一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，可将培养角瓶口端稍微抬高，直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶，加入新鲜培养基稀释至适当浓度，重复前述步骤即可。细胞培养常见问题的原因及对策